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2013 - Ana Luiza Sereia

MSc. Thesis

 

Autor/author: Ana Luiza Sereia

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas - Universidade Estadual de Maringá

Área do Conhecimento: Farmacognosia

Data de Defesa: 26 de fevereiro de 2013

Orientador: Prof. Dr. João Carlos Palazzo de Mello

Banca examinadora: Prof. Dr. Claudio Celestino de Oliveira

                            Prof. Dr. Gisely Cristiny Lopes

 

 

 

Título: Desenvolvimento de metodologia analítica por eletroforese capilar para identificação e quantificação de polifenois de fração semipurificada de  Trichilia catigua A. Juss. (Meliaceae)

Resumo: A espécie Trichilia catigua A. Juss., conhecida popularmente como catuaba, destaca-se por apresentar diversas atividades biológicas, como: ação antioxidante, analgésica, vasodilatadora (afrodisíaca), anti-inflamatória e antidepressiva. Considerando o interesse científico e econômico que esta espécie desperta, realizou-se a caracterização físico-química das cascas, extrato bruto (EB) e fração acetato de etila (FAE) de T. catigua, além do desenvolvimento e validação de uma metodologia por eletroforese capilar (EC) para separação, identificação e quantificação de polifenóis da FAE. Os ensaios farmacopeicos realizados para controle de qualidade físico-químico das cascas foram: determinação de material estranho (DME), umidade (UMI), cinzas totais (CT), cinzas insolúveis em ácido (CIA), análise granulométrica (AG) e teor de extrativos (TE). Os resultados obtidos foram: DME: 25,9%, UMI: 11,61% ± 0,25 (CV%=2,17), CT: 5,15% ± 0,066 (CV%=1,29), CIA: não quantificáveis, AG: d50 0,237 mm e TE: 25,99% ± 0,87 (m v-1) (CV%=3,34). As cascas, EB e FAE foram submetidos, ainda, a análises quantitativas para determinação do teor de polifenóis totais (PT), taninos totais (TT) e capacidade antioxidante frente ao radical DPPH (IC50). O teor de PT encontrado nas cascas, EB e FAE foram de 9,54% ± 0,24 (CV%=2,50), 42,34% ± 0,27 (CV%=0,63) e 68,86% ± 1,79 (CV%=2,60), respectivamente. O teor de TT foram de 7,07% ± 0,07 (CV%=0,93), 31,42% ± 0,37 (CV%=1,16) e 49,72% ± 2,10 (CV%=4,22), na mesma ordem. O IC50 (µg.ml-1) encontrado para o EB e FAE foram de 6,72 ± 0,28 (CV%=4,17) e 4,47 ± 0,07 (CV%=1,58), respectivamente. Para o desenvolvimento da metodologia analítica por EC avaliou-se a influência das variáveis comprimento de onda, voltagem, concentração e pH do tampão borato e uso de ciclodextrinas (CDs) como aditivos. A solução amostra foi submetida à extração em fase sólida. As condições eletroforéticas que propiciaram a separação dos picos da catequina, epicatequina, ácido clorogênico, PB1, PB2, cinchonaínas Ia, Ib, IIa e IIb foram: capilar de sílica fundida de 375 µm D.E. x 50 µm D.I. com comprimento de 50/60,2 cm, tampão borato 80 mmol l-1; pH 8,80; 2-hidroxipropil-β-CD 10 mmol l-1; 30 kV por 5,7 min, 5 kV por 2 min e 30 kV por 7,3 min a 25 ºC; injeção: 5 s (0,5 psi); detecção: 214 nm; FAE: 1 mg ml-1. O método desenvolvido apresentou seletividade e linearidade no intervalo de 20 a 120 µg ml-1 de ácido gálico (padrão interno), repetibilidade de 2,53%, precisão intermediária de 2,92%, exatidão de 100,46%, limite de detecção de 5,19 µg ml-1 e limite de quantificação de 17,29 µg ml-1. O método não foi robusto nas condições avaliadas. A solução amostra e a solução de ácido gálico apresentaram estabilidade inferior a 72 h, sob temperatura ambiente ou refrigeração. O método desenvolvido é o primeiro que emprega a tecnologia da EC para quantificação de polifenóis em fração semipurificada de T. catigua.

Palavras-chave: Trichilia catigua; desenvolvimento analítico; eletroforese capilar; polifenóis

 

Title: Development of analytical method by capillary electrophoresis for identification and quantification of polyphenols in a semipurified fraction of Trichilia catigua A. Juss. (Meliaceae)

Abstract: The species Trichilia catigua A. Juss., popularly known as “catuaba”, shows several biological activities including as an antioxidant, antinociceptive, vasodilator (aphrodisiac), anti-inflammatory and antidepressant. Considering the economic and scientific interest of this species, the physicochemical characterization of the bark, a crude extract (EB) and an ethyl-acetate fraction (FAE) of T. catigua was performed, and a methodology using capillary electrophoresis (CE) for the separation, identification and quantification of polyphenols in FAE was developed and validated. The pharmacopeia tests performed for physicochemical quality control of the bark were: determination of foreign matter (DME), water content (UMI), total ash (CT), acid-insoluble ash (CIA), granulometric analysis (AG) and determination of extractives (TE). The results were: DME: 25.9%, UMI: 11.61% ± 0.25 (CV%=2.17), CT: 5.15% ± 0.066 (CV%=1.29), CIA: unquantifiable, AG: d50 0.237 mm and TE: 25.99% ± 0.87(m v-1) (CV%=3.34). The bark, EB and FAE were submitted to quantitative analyses to determine the contents of total polyphenolics (PT) and total tannins (TT), and antioxidant activity using the DPPH scavenging method (IC50). The PT contents found in the bark, EB and FAE were 9.54% ± 0.24 (CV%=2.50), 42.34% ± 0.27 (CV%=0.63) and 68.86% ± 1.79 (CV%=2.60), respectively. The TT contents were 7.07% ± 0.07 (CV%=0.93), 31.42% ± 0.37 (CV%=1.16) and 49.72% ± 2.10 (CV%=4.22), in the same order. The IC50 (µg ml-1) found for EB and FAE were 6.72 ± 0.28 (CV%=4.17) and 4.47 ± 0.07 (CV%=1.58), respectively. For the development of the EC analytical methodology, the influence of the variables wavelength, voltage, concentration and pH of borate buffer and the use of cyclodextrins (CDs) as additives were evaluated. The sample solution was subjected to solid phase extraction. The electrophoretic conditions that enabled the separation of the peaks of catechin, epicatechin, chrologenic acid, PB1, PB2, and cinchonains Ia, Ib, IIa and IIb were: fused silica capillary of 375 µm D.E. x 50 µm D.I. with length of 50/60.2 cm, borate buffer 80 mmol l-1; pH 8.80; 2-hydroxypropyl-β-CD 10 mmol l-1; 30 kV for 5.7 min, 5 kV for 2 min and 30 kV for 7.3 min at 25 ºC; injection: 5 s (0.5 psi); detection: 214 nm; FAE: 1 mg ml-1. The method thus developed showed selectivity and linearity over the range 20-120 µg ml-1 of gallic acid (internal standard), repeatability 2.53%, intermediate precision 2.92%, accuracy 100.46%, limits of detection 5.19 µg ml-1 and limits of quantification 17.29 µg ml-1. The method was not robust under the conditions evaluated. The sample solution and the gallic-acid solution showed stability below 72 h, at room temperature or under refrigeration. This method is the first to use CE technology for quantification of polyphenols in a semipurified fraction of T. catigua.

Keywords: Trichilia catigua; analytical development; capillary electrophoresis; polyphenols

 

 

Dissertação PDFAna Luiza Sereia

 

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