2011 - Lia Akina Ito
MSc. Thesis
Autor/author: Lia Akina Ito
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas - Universidade Estadual de Maringá
Área do Conhecimento: Farmacognosia
Data de Defesa: 26 de agosto de 2011
Orientador: Prof. Dr. João Carlos Palazzo de Mello
Banca examinadora: Prof. Dr. Claudio Celestino de Oliveira
Prof. Dra. Juliana Rodrigues
Título: Desenvolvimento de metodologia analítica por eletroforese capilar para separação e identificação de cafeína e flavan-3-ol em extrato de Paullinia cupana var. sorbilis (Mart.) Ducke – Sapindaceae
Resumo: Paullinia cupana var. sorbilis (Mart.) Ducke, conhecida como guaraná, é uma planta originária da Amazônia brasileira. Suas sementes são empregadas popularmente como estimulante das funções cerebrais, afrodisíaco, tônico, diurético, febrífugo e sedativo. O guaraná apresenta alto conteúdo de metilxantinas e quantias consideráveis de taninos, que estão relacionadas com seus efeitos medicinais. Já foram citadas uma ampla gama de atividade biológica, tais como atividade antioxidante, antibacteriana, antidepressiva, antigenotóxica, anti-agregante e desagregante em plaquetas, melhora no desempenho cognitivo e físico, além de estimulante. Com o intuito de se obter uma metodologia rápida e exata na identificação das substâncias responsáveis por esta atividade biológica, neste trabalho foi desenvolvido uma metodologia empregando a eletroforese capilar na separação, identificação e quantificação de substâncias em fração semipurificada (EPA) de Paullinia cupana var. sorbilis (Mart.) Ducke. Foram empregadas duas técnicas de separação, a eletroforese capilar de zona (CZE) e a cromatografia eletrocinética micelar (MEKC). Em CZE, utilizou-se tampão borato 50 mmol l-1 em pH 8,5 adicionado de 1,0 mmol l-1 de β-ciclodextrina, voltagem aplicada de 20 kV, detecção em 214 nm, injeção da amostra por 3 s a 0,3 psi, temperatura do capilar em 25 ºC, obtendo-se a separação em 7 min dos picos de cafeína, ent-catequina, catequina e epicatequina, porém, o eletroferograma não apresentou picos simétricos. Na metodologia por MEKC foi utilizado tampão fosfato 40 mmol l-1 em pH 7,0 adicionado de 30 mmol l-1 de SDS, com voltagem aplicada de 20 kV, detecção a 214 nm, tempo de injeção da amostra de 5 s (0,5 psi) e temperatura do capilar em 25 ºC, apresentando um eletroferograma com boa resolução, possibilitando a identificação dos picos de cafeína, catequina, epicatequina, procianidina B1, procianidina B2 e procianidina B4. O método analítico por MEKC, mostrou-se seletivo, sensível, simples e de alta frequência analítica possibilitando separar as substâncias de referência cafeína, catequina e epicatequina em 20 min com tempos de migração de 8,94±0,22, 9,27±0,24 e 18,29±0,77, e limites de detecção e quantificação de 0,638, 1,465 e 0,965 µg/ml e 2,126, 4,883 e 3,217 µg/ml, respectivamente. No entanto, o método não apresentou robustez, com pequenas variações de voltagem.
Palavras-chave: Paullinia cupana, guaraná, metilxantinas, taninos, eletroforese capilar, validação.
Title: Development of analytical method by capillary electrophoresis for identification and quantification of cafein and falvan-3-ol in Paullinia cupana var. sorbilis (Mart.) Ducke – Sapindaceae extract
Abstract: Paullinia cupana var. sorbilis (Mart.) Ducke, known as Guarana, is a plant native from Brazilian Amazon. Its seeds are popularly used as a stimulator of brain functions, aphrodisiac, tonic, diuretic, febrifuge and sedative. Guarana has a high content of methylxanthines and considerable amounts of tannins, which are related to its medicinal effects. Already been mentioned a wide range of biological activity, such as antioxidant, antibacterial, antidepressant, antigenotoxic, anti-platelet aggregating and disintegrating, improved cognitive and physical performance, and stimulating. In order to obtain a rapid and accurate methodology to identify the substances responsible for this biological activity, in this study was developed a methodology using capillary electrophoresis for separation, identification and quantification of substances in the semipurified fraction (EPA) of Paullinia cupana var. sorbilis (Mart.) Ducke. Two techniques were employed for separation, the capillary zone electrophoresis (CZE) and micellar electrokinetic chromatography (MEKC). For CZE was used borate buffer 50 mmol l-1 at pH 8,5 with 1,0 mmol l-1 of β-cyclodextrin, applied voltage 20 kV, detection at 214 nm, sample injection for 3 s at 0,3 psi, capillary temperature of 25 ºC, resulting in separation of the peaks of caffeine, ent-catechin, catechin and epicatechin, however, the electropherogram did not show symmetrical peaks. The methodology used by MEKC was phosphate buffer 40 mmol l-1 at pH 7,0 supplemented with 30 mmol l-1 SDS, applied voltage of 20 kV, detection at 214 nm, sample injection time of 5 s at 0,5 psi and capillary temperature at 25 ° C, showing an electropherogram with good resolution, allowing the identification of the peaks of caffeine, catechin, epicatechin, procyanidin B1, procyanidin B2 and procyanidin B4. The analytical method by MEKC proved to be selective, sensitive, simple and high-frequency, allowing separate analytical reference substances caffeine, catechin and epicatechin in 20 min with migration times of 8,94 ± 0,22, 9,27 ± 0,24 and 18,29 ± 0,77, and limits of detection and quantification of 0,638, 1,465 and 0,965 mg/ml and 2,126, 4,883 and 3,217 mg/ml, respectively. However, the method did not provide robustness to small variations in voltage.
Keywords: Paullinia cupana, guaraná, methylxanthines, tannins, capillary electrophoresis, validation.
Dissertação PDF: Lia Akina Ito
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